Successful case
科研解决方案
多重PCR扩增子捕获技术是采用两步PCR扩增方法来完成目标区域扩增和建库的目的。捕获测序是一种位点突变的超速检测模式,即在保证扩增均一性的前提下,对SNP、Indel等几千甚至上万个突变位点进行快速靶向线性扩增后,使用主流测序平台进行大批量样本平行检测与深度分析的整体解决方案。
针对多重方案,单管位点个数至少可以做到 50~2000。
已定制过的物种:猪,鸡,马,猴,猕猴桃和病原微生物等。
多重引物设计基本原则
1、特异性高:无非特异性扩增及不与其它引物及自身产生引物二聚体;
2、引物长度控制在18~32bp左右;
3、引物退火温度基本一致;
4、扩增子长度控制在160~260bp(PE150测序);
1、物种名称;
2、物种的参考基因组数据/链接,如无参考基因组提供转录组信息,自行组装的基因组请备注;
3、位点坐标(bed文件),备选点增加20%。例,产品定义2K SNP,供设计的位点池至少2.2K;
位点筛选时需做注意:
1、位点附近突变数量不宜过多;
2、位点选择可以在全基因组均匀分布;
3、避免高拷贝,重复区域,GC异常,结构变异等;
4、样本品种间差异,尽量选择相对保守的区域;
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